عنوان: خالص كردن DNA از سلول هاي زنده

فرمت فایل: Word

تعداد صفحات: 25

توضیحات

مهندس ژنتيك نياز دارد كه در زمان هاي مختلف لااقل سه نوع DNA ي مشخص فراهم كند. ابتدا، كل DNA ي سلول اغلب به عنوان منبعي از مواد لازم است تا ژن هائي كه بايد همسانه شوند از آن بدست آيند. كل DNA ي سلول ممكن است از محيط كشت يك باكتريف از كي گياه، از سلول هاي جانوري يا از هر نوع موجود ديگر كه مورد مطالعه قرار مي گيرد باشد.

نوع دومِ DNA كه مورد نياز است، DNA خالص پلاسميد مي باشد. تهية DNA ي پلاسميد از يك نوع محيط كشت باكتري، همان مراحل اصلي خالص كردن كل DNA ي سلول را لازم دارد با اين تفاوت كلي يعني در برخي از مراحل DNA ي پلاسميد بايستي از تودة اصلي DNA ي كروموزومي كه همچنين در سلول موجود است جدا شود.

سرانجام، اگر از وسيله انتقال همسانه سازي فاژ استفاده شود، DNA فاژ ضروري خواهد بود. DNA ي فاژ، بيشتر از افراد باكتريو فاژ تهيه مي شود تا از سلول هاي آلوده شده، بنابراين هيچ مشكلي از نظر آلودگي با DNA ي باكتري وجود ندارد. به هرحال، روشهاي خاصي براي جدا كردن پوشش كپسولي فاژ مورد نياز است. فرم دو رشته اي همانند ساز M13، يك استثناء است كه از سلول هاي E. coli، درست مثل اينكه يك پلاسميد باكتريائي بوده باشد، تهيه شده است.

فهرست مطالب

• خالص كردن DNAاز سلول هاي زنده. 2
• تهيه كل DNAي سول.. 2
• رشد و برداشت در محيط كشت باكتريائي... 3
• تهية عصارة سلولي... 5
• خالص كردن DNAاز عصارة سلولي... 6
• غلظت نمونه هاي DNA.. 7
• اندازه گيري غلظت DNA.. 8
• تهيه تمامي DNAي سلول در موجوداتي غير از باكتري ها8
• تهيه DNAپلاسميد.. 10
• جداسازي بر اساس اندازه. 12
• جداسازي بر اساس شكل كلي... 13
• تكثير پلاسميد.. 16
• تهيه DNAي باكتريوفاژ. 17
• رشد كشت ها براي بدست آوردن مقدار زيادي .... 18
• تهيه فاژ ي غير لايزوژن.. 19
• جمع آوري فاژها از يك محيط كشت آلوده. 20
• خالص كردن DNAي از فاژهاي .... 20
• خالص كردن DNAي M13مشكلات كمي ايجاد مي كند 21